Le test ELISA détecte de nombreuses maladies, c'est pourquoi il a été largement utilisé en médecine et plus encore. Cependant, le test ELISA est surtout connu pour son diagnostic de la maladie de Lyme. Qu'est-ce que le test ELISA ? Comment interpréter les résultats ? Quel est le prix du test ?

Contenu :

  1. Test ELISA - que détecte-t-il ? Utilisation de l'ELISA
  2. Test ELISA - qu'est-ce que le test ?
  3. Test ELISA et maladie de Lyme - quand effectuer ?
  4. Test ELISA - prix. Combien coûte un test ELISA ?
  5. Test ELISA - résultats. Peuvent-ils être de faux positifs ?
  6. Test ELISA - résultats. Peuvent-ils être des faux négatifs ?

Le test ELISA , c'est-à-dire le dosage immuno-enzymatique, est une méthode de laboratoire couramment utilisée qui sert, entre autres, à pour la détection quantitative des anticorps dans le sang.

En raison de celatest ELISAtrouvéapplicationdans le diagnostic de maladies bactériennes, telles quemaladie de Lyme avec Lyme.

L'avantage de la méthode ELISA est sa simplicité, sa rapidité d'exécution et sa grande sensibilité. La méthode ELISA est réalisée à l'aide de plaques en plastique spéciales avec des puits remplis, par exemple, de protéines de Borrelia (antigènes) et d'anticorps monoclonaux spécifiques, conçus pour détecter les anticorps dans l'échantillon du patient.

Test ELISA - que détecte-t-il ? Utilisation de l'ELISA

La haute sensibilité et la simplicité de la méthode ELISA l'ont rendue applicable dans le diagnostic de nombreuses maladies, mais elle est surtout connue comme la méthode de diagnostic de la maladie de Lyme.

Dans le diagnostic de la borréliose de Lyme, le soi-disant ELISA indirect, qui permet de détecter des IgM ou IgG spécifiques dans le matériel testé. De la même manière, les anticorps peuvent être détectés à des fins de diagnostic :

  • infections virales : virus de l'herpès (herpès, zona, Epstein-Barr, cytomégalovirus), VIH, virus de l'hépatite (VHB et VHC)
  • infections à protozoaires : toxoplasmose, giardiase
  • maladies auto-immunes : maladie coeliaque (anticorps anti-tTG ou anti-DPG), maladie de Hashimoto (anticorps anti-TG et anti-TPO), maladies inflammatoires de l'intestin (anticorps anti-ASCA et anti-ANCA)
  • maladies parasitaires et allergies,dans lequel des anticorps IgE spécifiques sont détectés. Leur niveau accru peut indiquer la présence d'allergies, par exemple au pollen et à la nourriture, ou d'invasions parasitaires (ténia armé, ascaris humain)

Il existe également des modifications de la méthode ELISA (dite sandwich ELISA), qui permettent la détection d'un échantillon testé de protéines autres que les anticorps. Ensuite, le but de la recherche est de détecter dans le matériel biologique :

  • fragments de virus ou de bactéries, il s'agit le plus souvent d'antigènes spécifiques à un pathogène donné
  • hormones sériques, par exemple œstrogène, prolactine, TSH, fT4, cortisol
  • enzymes, par exemple calprotectine, élastase pancréatique, phosphatase alcaline
  • marqueurs tumoraux, par exemple CA-125
  • présence de médicaments dans le sérum

Cette méthode est également utilisée dans l'industrie alimentaire, où des traces d'allergènes (par exemple lait, cacahuètes), d'OGM ou de toxines dans les aliments peuvent être détectées.

Test ELISA - qu'est-ce que ce test ?

Le diagnostic, par exemple, de la borréliose de Lyme à l'aide de la méthode ELISA consiste à détecter des protéines immunitaires dans le matériel biologique - des anticorps qui apparaissent lors de la réponse contre les antigènes de Borrelia.

Les anticorps sont testés en deux classes, IgM et IgG. Les IgM sont les premiers anticorps à apparaître dans l'organisme au contact des bactéries et à décliner avec le temps.

Ils sont remplacés par des anticorps IgG plus persistants qui peuvent rester dans l'organisme pendant plusieurs dizaines d'années.

De cette manière, la présence de bactéries dans le corps est indirectement testée en détectant des anticorps spécifiquement dirigés contre les spirochètes Borrelia.

Les anticorps à différents stades de l'infection peuvent être dirigés contre une variété de protéines de Borrelia. Par exemple, à un stade précoce, il s'agit de la protéine p41.

Aux stades ultérieurs, de plus en plus de protéines commencent à apparaître, telles que p21, p30, p39, p43. C'est pourquoi le diagnostic de la maladie de Lyme est extrêmement difficile.

La sélection des protéines bactériennes est extrêmement importante pour que le test ait une haute valeur diagnostique. Par conséquent, dans le diagnostic de la maladie de Lyme, il convient d'utiliser systématiquement des tests ELISA de génération II ou III, dans lesquels les ensembles de protéines sont sélectionnés de manière à obtenir le résultat le plus fiable.

Test ELISA et maladie de Lyme. Quand jouer ?

La borréliose de Lyme est une maladie bactérienne causée par la bactérie Borrelia burgdorferi et ses nombreuses variétés.

Le diagnostic de la maladie n'est pas facile en raison de la complexité de la réponse immunitaire contre Borrelia et des imperfections des méthodes de laboratoire.

La méthode de laboratoire la plus largement utilisée est la méthode ELISA très sensible qui détecte les anticorps spécifiques dirigés contre les protéines bactériennes.

Dans le diagnostic de la borréliose de Lyme, une méthode ELISA indirecte est utilisée dans laquelle les étapes suivantes sont distinguées:

  • incubation des puits sur la plaque avec du matériel prélevé sur le patient, par exemple du sérum. S'il y a des anticorps contre Borrelia dans le matériel testé, ils se lient aux protéines au fond du puits de réaction
  • puis l'excès de sérum est rincé avec un liquide de lavage spécial (tampon) et le soi-disant conjugué, c'est-à-dire un anticorps lié à une enzyme qui se lie aux anticorps précédemment liés dans les puits de réaction
  • Le substrat pour le conjugué est ajouté plus tard et il n'y a pas (positif) ou pas de réaction colorée (négative)
  • la dernière étape est la lecture par le lecteur (spectrophotomètre) de la concentration d'anticorps contre Borrelia dans le sérum du patient

La méthode ELISA pour la maladie de Lyme est réalisée avec du sang et, en cas de symptômes neurologiques (neuroborréliose), également avec le liquide céphalo-rachidien.

Le liquide synovial ne doit pas être testé car il existe une forte probabilité de résultats faussement positifs.

Le diagnostic de la maladie repose sur les symptômes cliniques qui l'indiquent, confirmés par les résultats des tests de laboratoire.

L'ajout d'un résultat de test de laboratoire sans la présence de symptômes n'autorise pas le diagnostic de la maladie de Lyme, car il a été démontré que des anticorps dirigés contre les spirochètes Borrelia sont également détectés chez les personnes en bonne santé.

Le diagnostic sérologique de la borréliose de Lyme commence par un test de dépistage ELISA semi-quantitatif. Si le résultat est négatif, cela signifie qu'aucun spirochète Borrelia n'a été détecté ou que le résultat est faux négatif.

Si le résultat est positif ou faiblement positif (équivoque), test Western blot de confirmation, qui est hautement spécifique.

Il s'agit de confirmer la "véracité" des résultats obtenus avec la méthode ELISA. Pendant le diagnostic, vous ne pouvez ignorer aucune des étapes ci-dessus et, par exemple, effectuer un diagnostic à l'aide de la méthode Western blot ou établir un diagnostic basé sur un résultat positif uniquement à l'aide de la méthode ELISA.

En Pologne, le diagnostic de la maladie de Lyme se termine très souvent au premier stade du dépistage, ce qui entraîne une mauvaise interprétation des résultats positifs ou faiblement positifs.

Bon à savoir

Test ELISA - prix. Combien coûte un test ELISA ?

Le test coûte environ 60zlotys et est fait tout de suite. Cependant, vous pouvez attendre environ trois mois pour les résultats de la saisine.

Test ELISA - résultats. Peuvent-ils être de faux positifs ?

Les résultats faussement positifs résultent de la réactivité croisée des anticorps IgM avec d'autres protéines. Les anticorps produits par le corps peuvent "incorrectement" reconnaître un antigène d'autres micro-organismes comme l'antigène Borrelia.

Les "erreurs" les plus courantes se produisent chez les personnes infectées par le tréponème pallidum, les virus de l'herpès et chez les personnes atteintes de lupus érythémateux disséminé et d'autres maladies rhumatismales.

Test ELISA - résultats. Peuvent-ils être des faux négatifs ?

Des résultats faussement négatifs peuvent apparaître au début de l'infection, puis le test doit être répété après environ 3-4 semaines. C'est appelé fenêtre sérologique, c'est-à-dire la période initiale d'infection au cours de laquelle l'organisme n'a pas encore "réussi" à produire des anticorps spécifiques.

De même, chez les personnes immunodéprimées qui ne produisent pas suffisamment d'anticorps.

Un gros problème, surtout dans les infections très intenses, est l'apparition de la soi-disant complexes immuns constitués d'antigènes de spirochètes de Borrelia et d'anticorps spécifiques pour ceux-ci.

Cela rend les anticorps "invisibles" aux méthodes couramment utilisées telles que ELISA, et bien qu'ils soient présents dans le matériel testé, ils ne peuvent pas être détectés.

Dans de tels cas, le laboratoire peut utiliser la décomposition des complexes immuns. Ce traitement est conçu pour libérer les anticorps. Cependant, cette méthode n'est pas largement utilisée en raison du manque de standardisation dans les laboratoires.

Bon à savoir

Pourquoi le diagnostic de la maladie de Lyme n'est-il pas facile ?

Cela est dû à la complexité de la réponse immunitaire contre Borrelia et aux limites des méthodes de laboratoire. La diversité des variétés et l'émergence de nouvelles infections à l'origine d'infections, notamment sur le continent européen, ne facilitent pas le développement de méthodes de diagnostic efficaces.

Plus de variétés sont apparues récemment en Europe, comme Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana et Borrelia spielmanii. De plus, dans le corps, les spirochètes Borrelia peuvent se transformer en kystes ou rester dans des endroits du corps inaccessibles aux cellules du système immunitaire.

Être ainsi "invisible" pour le système immunitaire. De plus, il a été montré que les tissus peuvent contenir des fragments de bactéries qui ont des propriétés fortement pro-inflammatoires. On pense qu'ils sont responsables des symptômes chroniques de la maladie de Lyme, malgré les résultats négatifs de l'étudelaboratoire

Références

1. Witecka-Knysz E. et al Maladie de Lyme : pourquoi le diagnostic est-il si difficile ? Diagnosticien de laboratoire Avril 2007.2. Lignes directrices actuelles de Moore A. et al., pièges cliniques courants et orientations futures pour le diagnostic en laboratoire de la maladie de Lyme, États-Unis. Urgence Infect Dis. 2016 juillet 22 (7) .3. Diagnostic en laboratoire des maladies transmises par les tiques Recommandations du groupe de travail : Chambre nationale des diagnostiqueurs de laboratoire, Institut national de santé publique-Institut national d'hygiène, Consultant national dans le domaine des maladies infectieuses, Département des maladies infectieuses et des neuroinfections, Université médicale de Białystok, Société polonaise de virologie, Varsovie 2014. Hosseini S. i co : dosage immuno-enzymatique (ELISA) de A à Z. Springer 2022.

A propos de l'auteurKarolina Karabin, MD, PhD, biologiste moléculaire, diagnosticienne de laboratoire, Cambridge Diagnostics PolskaBiologiste de profession, spécialisé en microbiologie et diagnosticien de laboratoire avec plus de 10 ans d'expérience en laboratoire. Diplômé du Collège de médecine moléculaire et membre de la Société polonaise de génétique humaine, responsable des bourses de recherche au Laboratoire de diagnostic moléculaire du Département d'hématologie, d'oncologie et des maladies internes de l'Université de médecine de Varsovie. Elle a défendu le titre de docteur en sciences médicales dans le domaine de la biologie médicale à la 1ère Faculté de médecine de l'Université de médecine de Varsovie. Auteur de nombreux ouvrages scientifiques et de vulgarisation scientifique dans le domaine du diagnostic de laboratoire, de la biologie moléculaire et de la nutrition. Au quotidien, en tant que spécialiste dans le domaine du diagnostic de laboratoire, il dirige le département de contenu de Cambridge Diagnostics Polska et coopère avec une équipe de nutritionnistes à la CD Dietary Clinic. Il partage ses connaissances pratiques sur le diagnostic et la thérapie diététique des maladies avec des spécialistes lors de conférences, de sessions de formation, de magazines et de sites Web. Elle s'intéresse particulièrement à l'influence du mode de vie moderne sur les processus moléculaires du corps.

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